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非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室將會(huì)越來越重要。

檢疫實(shí)驗(yàn)室也被稱為動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室，目前國家最重視的檢疫類實(shí)驗(yàn)室就是非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室。2019年7月份，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下達(dá)通知，要嚴(yán)格開展非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測，減少動(dòng)物疫病的風(fēng)險(xiǎn)。

非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室主要針對跨省調(diào)運(yùn)種豬在產(chǎn)地檢疫實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測，對生豬進(jìn)行對口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒病、布魯氏菌病等5種動(dòng)物疫病的檢驗(yàn)檢測及風(fēng)險(xiǎn)評估。

豬瘟有多可怕？

科普時(shí)間

眾所周知，非洲豬瘟是一種非常可怕的疾病，會(huì)導(dǎo)致豬大批量的死亡。其特征是發(fā)病過程短，最急性和急性感染死亡率高達(dá)100%，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱，心跳加快，呼吸困難，部分咳嗽，眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié)、腎、胃腸粘膜明顯出血，非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似，只能依靠實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測確診。

不過不用擔(dān)心的是非洲豬瘟，只傳染豬不傳染人。非洲豬瘟不是“人畜共患病”，不傳染人，但對豬來說是非常致命的。非洲豬瘟疫情需要農(nóng)業(yè)部門和養(yǎng)殖者的重視。

2007年以來，非洲豬瘟在全球多個(gè)國家發(fā)生、擴(kuò)散、流行，特別是俄羅斯及其周邊地區(qū)。2017年3月，俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)伊爾庫茨克州發(fā)生非洲豬瘟疫情，疫情發(fā)生地距離我國較近，僅為1000km左右；

我國是養(yǎng)豬及豬肉消費(fèi)大國，生豬出欄量、存欄量以及豬肉消費(fèi)量均位于全球首位，每年種豬及豬肉制品進(jìn)口總量巨大，與多個(gè)國家貿(mào)易頻繁；而且，我國與其它國家的旅客往來頻繁，旅客攜帶的商品數(shù)量多、種類雜。因此，非洲豬瘟傳入我國的風(fēng)險(xiǎn)日益加大，一旦傳入，其帶來的直接以及間接損失將不可估量。

對此，2017 年 4 月 12 日，我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)非洲豬瘟風(fēng)險(xiǎn)防范工作的緊急通知。2019年7月份，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部下達(dá)通知要嚴(yán)格開展非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測，減少動(dòng)物疫病的風(fēng)險(xiǎn)。

農(nóng)村農(nóng)業(yè)部最新通知

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部表示，為貫徹落實(shí)《國務(wù)院辦公廳關(guān)于加強(qiáng)非洲豬瘟防控工作的意見》(國辦發(fā)〔2019〕31號)要求，建立產(chǎn)地檢疫風(fēng)險(xiǎn)評估機(jī)制，促進(jìn)種豬規(guī)范有序調(diào)運(yùn)，穩(wěn)定生豬生產(chǎn)發(fā)展，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部就非洲豬瘟疫情應(yīng)急響應(yīng)期間，調(diào)整和加強(qiáng)跨省調(diào)運(yùn)種豬產(chǎn)地檢疫有關(guān)事項(xiàng)發(fā)布通知，要求調(diào)整跨省調(diào)運(yùn)種豬產(chǎn)地檢疫實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目，嚴(yán)格開展動(dòng)物疫病風(fēng)險(xiǎn)評估。

通知要求，根據(jù)當(dāng)前生豬生產(chǎn)形勢需要和動(dòng)物防疫管理工作實(shí)際，對跨省調(diào)運(yùn)種豬產(chǎn)地檢疫實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目進(jìn)行調(diào)整，繼續(xù)嚴(yán)格開展非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測，檢測數(shù)量(比例)100%；對口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒病、布魯氏菌病等5種動(dòng)物疫病，在種豬場日常監(jiān)測的基礎(chǔ)上開展風(fēng)險(xiǎn)評估，不再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測。在非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測方面，采集的血液樣品可按照一定的生豬數(shù)量進(jìn)行混樣，具體混樣數(shù)量可根據(jù)有關(guān)技術(shù)指標(biāo)科學(xué)確定；樣品送檢前至種豬調(diào)出前對擬調(diào)運(yùn)種豬采取隔離觀察措施的，檢測時(shí)限可以延長至調(diào)運(yùn)前7天。

在嚴(yán)格開展動(dòng)物疫病風(fēng)險(xiǎn)評估方面，通知提出，在暫?？谔阋叩?種動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測期間，各地要加強(qiáng)對種豬場的動(dòng)物疫病風(fēng)險(xiǎn)評估，風(fēng)險(xiǎn)評估達(dá)到要求的，方可對其跨省調(diào)運(yùn)種豬出具動(dòng)物檢疫證明。請各省級畜牧獸醫(yī)主管部門制定本省份的種豬場動(dòng)物疫病風(fēng)險(xiǎn)評估方案，評估病種應(yīng)當(dāng)包括口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病毒病、布魯氏菌病等動(dòng)物疫病，評估內(nèi)容應(yīng)當(dāng)包括區(qū)域動(dòng)物疫病流行病學(xué)調(diào)查情況、種豬場防疫條件、養(yǎng)殖檔案記錄、有關(guān)疫病日常檢測情況等。由輸出地縣級動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)按照種豬場動(dòng)物疫病風(fēng)險(xiǎn)評估方案，對種豬場開展風(fēng)險(xiǎn)評估。評估結(jié)果有效期不超過3個(gè)月。

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部指出，跨省調(diào)運(yùn)種豬到達(dá)輸入地后，當(dāng)?shù)貏?dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)要監(jiān)督種豬貨主落實(shí)動(dòng)物防疫主體責(zé)任，嚴(yán)格執(zhí)行隔離觀察有關(guān)措施，指導(dǎo)種豬貨主簽訂承諾書、建立隔離觀察臺(tái)賬記錄，確保種豬安全和可追溯。

非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室如何建設(shè)？

設(shè)計(jì)方案

國家越來越重視非洲豬瘟對農(nóng)業(yè)與養(yǎng)殖業(yè)的影響，所以越來越多人開始建設(shè)檢疫實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行動(dòng)物疫病的檢測項(xiàng)目。那么，非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該如何建設(shè)呢？

非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，從試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)單向流動(dòng)。

實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制是非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室的重中之重，雖然非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室沒有嚴(yán)格的空氣潔凈度要求，但是為避免各個(gè)功能區(qū)之間交叉污染的可能性，應(yīng)采用獨(dú)立送風(fēng)、全送全排的氣流組織形式，并保證各功能區(qū)的壓力梯度要求。

試劑準(zhǔn)備區(qū)

主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

標(biāo)本制備區(qū)

主要進(jìn)行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。

擴(kuò)增區(qū)

已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

產(chǎn)物分析區(qū)

主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測定。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。

非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室的核心問題是如何避免污染，由于一旦發(fā)生污染，實(shí)驗(yàn)就必須停止，直到找到污染源為止，而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須作廢，需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所以發(fā)生污染后再圍繞實(shí)驗(yàn)室來尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣，浪費(fèi)人力物力。非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室常見有擴(kuò)增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染等。因此要避免污染，事前預(yù)防是關(guān)鍵。

專業(yè)的設(shè)計(jì)是避免污染的源頭，首先應(yīng)做到各個(gè)功能區(qū)域科學(xué)合理布置；各個(gè)功能區(qū)域要有明顯的標(biāo)記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等)，以避免各個(gè)不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。

其次應(yīng)具備合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用獨(dú)立送風(fēng)、全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；嚴(yán)格的壓力梯度控制、緩沖、門開啟關(guān)閉互鎖，以確保“不串風(fēng)”。

用于非洲豬瘟病毒檢測的實(shí)驗(yàn)室，推薦配置以下設(shè)備：II級生物安全柜、混勻儀（渦旋振蕩器）、高速離心機(jī)、金屬浴或恒溫水浴鍋、組織破碎儀（均質(zhì)器/勻漿儀）、移液器、冷藏冷凍冰箱、高壓滅菌鍋。同時(shí)，建議實(shí)驗(yàn)室配備合適的個(gè)人防護(hù)用品，如防護(hù)服、手套、口罩等。

系統(tǒng)的培訓(xùn)、規(guī)范的管理是非洲豬瘟成功運(yùn)行的重點(diǎn)，可圍繞以下內(nèi)容建立健全培訓(xùn)與管理制度：

1、擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的工作；

2、操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施；

3、在實(shí)驗(yàn)操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換；

4、清潔工作及時(shí)、正確；除常規(guī)的消毒液體對表面進(jìn)行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外，對一些實(shí)驗(yàn)設(shè)備還應(yīng)進(jìn)行高壓消毒處理；

5、嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員；實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進(jìn)行清潔；與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室，有條件的情況下要設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的門；盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。

6、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實(shí)驗(yàn)室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等；

7、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)；

8、完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如生物安全柜、離心機(jī)、紫外滅菌燈、超凈工作臺(tái)、加樣器等；

AT THE END

結(jié)尾總結(jié)

非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室會(huì)越來越重要

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性動(dòng)物傳染病，臨床上以高熱、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)出血和高死亡率為特征，易感豬群的病死率高達(dá)100%。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。目前，針對非洲豬瘟防控，尚無有效的商品化疫苗，防控重點(diǎn)是做好生物安全管理和早期診斷撲殺凈化。所以非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)會(huì)越來越重要。

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